단 계
Understand “Gramstaining”
Distinguish“Gram positive & negative”via Gramstaining method
Introduction & Background
Hans Christian Gram(1853~1938)→ Bacteriologist in Denmark
In 1884 → Develop GramStaining
Gramstaining
Methoed of diffentiating bacterial species → Two large groups (Gram positive & negative) → Using crystal violet (triarylmetha
Keeping size and shape of cell
Preventing rupture of cells
by osmotic pressure
Hard because of Peptidoglycan
- 20 ~ 80mm : gram-positive
- 7 ~ 8 mm : gram-negative
24hours cultured
E.Coli in medium
Crystal violet
Gram iodine
95% ethyl-alcohol
Safranin solution
(25% safranin in 50% ethyl-alcohol)
Wash th
통해 Gramstaining의 원리에 대해서 알아보고 실험을 통해 그램 양성균(Gram-negative bacteria)과 그램 양성균(Gram-positive bacteria)으로 구분을 해본다.
Ⅱ. 본 론
1. 이론적 배경
그램 염색법은 각종 검체 및 배양집단의 현미경적 검사에 이용되며 미생물에 의한 감염여부를 조기에 진단할 수 있게 해준다.
Gramstaining
1884년 덴마크의 의사 Hans Christian Gram에 의해서 처음으로 개발된 방법
미생물 감염여부를 조기 진단 가능
Gramstaining 방법
1. Slide에 염색할 박테라아 표본을 놓 는다. 2. Crystal violet을 1~2분간 가해 염색한다
3. 염색약을 흘려버린다.
4. Gram’s iodine 용액을 가한 다음 1~2분간 둔다.
미생물학및실험 Report 2021 March 19
미생물학 실험 Report
의생명공학과
Ⅰ. 기본정보
실험 제목: 현미경 사용법 및 단순염색 (simple stain)과 그람염색 (gramstain)
실험 목적: 균의 형태, 크기, 배열상태 등을 관찰할 수 있다. 그람염색을 통해 그람 양성균과 음성균을 구분하고, 염색의 원리와 방법을 습득할
2) 원리
Gram positive bacteria와 Gramnegative bacteria는 cell membrane의 구성에 큰 차이가 있다. 그 중 Gramstaining에 영향을 주는 peptidoglycan층의 두께가 Gram positive bacteria가 훨씬 두꺼워 위의 Gramstaining 단계에서 crytal violet-iodine의 decolorization이 일어나지 못해 Gram +는 purple, Gram -는 red을 띄게 된다.
But, 오래된
Gram의 시도
폐렴으로 사망한 환자의 조직에서 세균 염색
Crystal violet으로 염색-Lugol’s iodine 매염-ethanol 탈색
색이 남아있는 것(Gram-positive), 바랜 것 (Gram-negative)로 구분
당시 세균 염색 : Paul Erlich, alkaline aniline 염색법
수년 후, 독일 병리학자 Carl Weigart 대조염색으로 safranin 사용
1921 Hucker’s modification